什么是核酸分子杂交

在肿瘤学研究中，为了检测待检基因或其表达产物的性质和数量，常需应用核酸分子杂交技术。核酸分子杂交技术一般可分成两种，一种是窄缝杂交，另一种是印迹转移杂交。窄缝杂交由于加样最准确性及特导性较差，现在已很少应用。印迹转移杂交也分成两种，一种是Southern blot杂交，用于检测DNA样品；另一种是Northern blot杂交，用于检测RNA样品。简单介绍一下这些技术的原理，注意事项及应用。

（1）Southern blot杂交 将一定量的DNA样品用适当的限制性内切酶切割成不同长度的DNA片段，然后在琼脂糖凝胶上进行电泳分离，如加样量相等，酶解适当，则在用溴化乙锭染色时，应显示长度及亮度均相等的DNA拖带。电泳后的凝胶须经碱变性处理，使DNA解离成单链，然后用毛细管虹吸法或电转移法，使凝胶上的单链DNA片段，按凝胶上相同的位置转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜，经适当洗涤、凉干后，在80℃烤箱中加温2小时，即可用于杂交。用于检测DNA的已知探针，一般由带有该片段的细菌质粒中制备。纯化的探针DNA一般用放射性同位素32P或生物素、地高辛配基等标记。杂交前探针必须加温至100℃变性处理。杂交后的膜在暗盒中进行放射自显影后，即在一定的位置显示同标记探针特异地结合的阳性DNA条带。Southern blot杂交法可检测癌基因的存在及其扩增，也可检测抑癌基因的杂合性丢失。

（2）Northern blot杂交 Northern blot杂交的原理与Southern blot杂交基本相同。所不同处在于，RNA远不如DNA稳定，很容易被RNA酶降解，而RNA酶不仅广泛存在，而且加热至100℃也不能使其灭活，所以在操作RNA时所用的一切器皿和溶液都必需经过严格的消除RNA酶的处理。另外，RNA的电泳必须在含甲醛或乙二醛的变性凝胶中进行。Northern blot杂交主要应用于检测癌基因或基他肿瘤相关基因的过度表达，也可检测抑癌基因的低表达或不表达。

核酸分子杂交的名词解释

核酸杂交（ Hybridization）：　互补的核苷酸序列（DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA等）通过Watson-Crick碱基配对形成非共价键,从而形成稳定的同源或异源双链分子的过程,成为核酸分子杂交技术,又称核酸杂交。

核酸分子杂交的主要实验方法有哪些？主要用途是什么

核酸分子杂交的主要实验方法和主要用途分述如下：

一、方法：核酸分子杂交的主要实验方法有：膜上杂交和原位杂交

杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA，也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方法被检测的核酸可以是提纯的，也可以在细胞内杂交，即细胞原位杂交。探针必须经过标记，以便示踪和检测。使用最普遍的探针标记物是同位素，但由于同位素的安全性，近年来发展了许多非同位素标记探针的方法。

二、应用：

核酸分子杂交作为一项基本技术，已应用于核酸结构与功能研究的各个方面。核酸分子杂交具有很高的灵敏度和高度的特异性，因而该技术在分子生物学领域中已广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用，而且在临床诊断上的应用也日趋增多。

在医学上，目前已用于多种遗传性疾病的基因诊断（gene diagnosis），恶性肿瘤的基因分析，传染病病原体的检测等领域中，其成果大大促进了现代医学的进步和发展。

基因工程第三步目的基因的鉴定中

1.鉴定目的基因是否整合到染色体DNA上：DNA-DNA分子杂交

2.鉴定目的基因是否准确表达蛋白质：RNA-DNA分子杂交或抗原-抗体杂交。

注：其中DNA-DNA分子杂交与RNA-DNA分子杂交属于核酸分子杂交。